Desenvolupen anàlisi LAMP per diagnosticar els nivells alts d’ADN del VHB
A tot el món, 257 milions de persones estan infectades crònicament amb el virus de l’hepatitis B (VHB) i 887.000 moren anualment de cirrosi o càncer de fetge.
Donat que més del 95% de les persones infectades amb el VHB viuen en països d’ingressos baixos i mitjans i només el 12-25% de les persones infectades són elegibles per a la teràpia anti-VHB.
L’assaig d’amplificació isotèrmica mediada per bucle (LAMP) és una prova d’àcid nucleic (NAT) que utilitza ADN polimerasa amb una alta activitat de desplaçament de fil de cicle automàtic i sis encebadors especialment dissenyats. LAMP té les següents característiques que permeten el seu ús com una prova ràpida, fiable i econòmica en el punt d’atenció als països amb ingressos baixos i mitjans amb una alta eficiència d’amplificació que permet la detecció ràpida d’àcids nucleics.
Un gran equip de científics mèdics associats amb l’Institut Pasteur (Paris, França) va dissenyar conjunts d’encebadors pangenotípics a regions conservades del gen del VHB. L’exactitud de LAMP per identificar pacients altament virèmics es va avaluar en 400 i 550 persones infectades pel VHB a França i Senegal, respectivament. La validació analítica es va realitzar emprant una LAMp turbidimètrica en temps real (Loopamp LA-500, Eiken Chemical, Japó). Les càrregues virals es van quantificar mitjançant una PCR en temps real AMPLIX (Biosynex, Illkirch-Graffenstaden France).
L’equip va informar que els seus encebadors van detectar amb èxit vuit genotips / subgenotips principals del VHB (A1/2/3/B/C/D/E/F) amb un límit de detecció que oscil·lava entre 40 i 400 UI/mL. A França, l’àrea sota la corba de característiques operatives del receptor (AUROC), la sensibilitat i l’especificitat de l’extracció basada en perles i la LAMP turbidimètrica en temps real van ser 0,95, 91,1% i 86,0%, respectivament, per diagnosticar el ADN del VHB ≥ 20.000 UI/mL; i 0,98, 98,0% i 94,6% per ≥200.000 UI/mL.
El rendiment no va variar segons els genotips vitals. Al Senegal, mitjançant un mètode adaptat al camp, extracció per bullit i centrifugat, sense reactius i detecció de fluorescència de punt final econòmica, l’AUROC, la sensibilitat i l’especificitat van ser 0,95, 98,7% i 91,5%, respectivament, per diagnosticar el ADN del VHB ≥200.000 UI/mL. L’assaig no es va adaptar per discriminar la virèmia de baix nivell.
Els autors van concloure que havien desenvolupat una alternativa simple, ràpida (60 minuts) i econòmica (8 dòlars / anàlisi) a la PCR per diagnosticar una virèmia alta ≥200.000 UI/mL. La prova VHB-LAMP pot contribuir a eliminar la transmissió materna-infantil del VHB mitjançant la identificació de dones embarassades d’alt risc elegibles per a la profilaxi antiviral en països amb recursos limitats. L’estudi va ser publicat el 7 d’abril del 2021 a la revista Clinical Microbiology and Infection.
Font: labmedica.com
Notícia traduïda per l’ASSCAT
