Desarrollan análisis LAMP para diagnosticar los niveles altos de ADN del VHB
En todo el mundo, 257 millones de personas están infectadas crónicamente con el virus de la hepatitis B (VHB) y 887.000 mueren anualmente de cirrosis o cáncer de hígado.
Dado que más del 95% de las personas infectadas con el VHB viven en países de ingresos bajos y medios y sólo el 12-25% de las personas infectadas son elegibles para la terapia anti-VHB.
El ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) es una prueba de ácido nucleico (NAT) que utiliza ADN polimerasa con una alta actividad de desplazamiento de hebra de ciclo automático y seis cebadores especialmente diseñados. LAMP tiene las siguientes características que permiten su uso como una prueba rápida, confiable y económica en el punto de atención en los países con ingresos bajos y medios con una alta eficiencia de amplificación que permite la detección rápida de ácidos nucleicos.
Un gran equipo de científicos médicos asociados con el Instituto Pasteur (París, Francia), diseñó conjuntos de cebadores pangenotípicos en regiones conservadas del gen del VHB. La exactitud de LAMP para identificar pacientes altamente virémicos se evaluó en 400 y 550 personas infectadas por el VHB en Francia y Senegal, respectivamente. La validación analítica se realizó utilizando una LAMP turbidimétrica en tiempo real (Loopamp LA-500, Eiken Chemical, Japón). Las cargas virales se cuantificaron mediante una PCR en tiempo real AMPLIX (Biosynex, Illkirch-Graffenstaden France).
El equipo informó que sus cebadores detectaron con éxito ocho genotipos / subgenotipos principales del VHB (A1/2/3/B/C/D/E/F) con un límite de detección que oscilaba entre 40 y 400 UI/mL. En Francia, el área bajo la curva de características operativas del receptor (AUROC), la sensibilidad y la especificidad de la extracción basada en perlas y la LAMP turbidimétrica en tiempo real fueron 0,95, 91,1% y 86,0%, respectivamente, para diagnosticar el ADN del VHB ≥ 20.000 UI/mL; y 0,98, 98,0% y 94,6% para ≥200.000 UI/mL.
El rendimiento no varió según los genotipos virales. En Senegal, mediante un método adaptado al campo, extracción por hervido y centrifugado sin reactivos y detección de fluorescencia de punto final económica, el AUROC, la sensibilidad y la especificidad fueron 0,95, 98,7% y 91,5%, respectivamente, para diagnosticar el ADN del VHB ≥200.000 UI/mL. El ensayo no se adaptó para discriminar la viremia de bajo nivel.
Los autores concluyeron que habían desarrollado una alternativa simple, rápida (60 minutos) y económica (8 dólares / análisis) a la PCR para diagnosticar una viremia alta ≥200.000 UI/mL. La prueba VHB-LAMP puede contribuir a eliminar la transmisión materno-infantil del VHB mediante la identificación de mujeres embarazadas de alto riesgo elegibles para la profilaxis antiviral en países con recursos limitados. El estudio fue publicado el 7 de abril de 2021 en la revista Clinical Microbiology and Infection.
Fuente: labmedica.com
